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人類卵子的冰凍與應用
 人類卵子的冰凍與應用

1983 Trounson等人利用慢速冷凍法將分裂期的胚胎冷凍,再進行解凍植入,完成了世界第一例人類冷凍解凍胚胎活產的報告;之後Chen (1986)報告第一個冰凍卵子解凍植入成功懷孕的案例。隨後慢速冷凍技術被廣泛的用於臨床上胚胎的冷凍;然而人類卵子的冷凍發展卻不如胚胎冷凍的發展那麼迅速。解凍後存活率、受精率,及胚胎發育率均不高,使得隨後的十多年,臨床應用的步驟遂緩慢下來。自從二十世紀末冷凍卵子的實驗技術逐漸穩定成熟,臨床懷孕成功的報告也逐漸增加。目前應是可以考慮列在臨床常規服務的項目之一的時機了。

 

   女性卵子的冷凍保存可以是成熟卵或不成熟卵。成熟卵子MII期冷凍的好處是解凍後可以馬上使用,而不需再經過卵子的體外成熟步驟。目前卵子的體外成熟方式仍有待進一步改善。

   在冰凍的過程中,卵子的許多層面均會受到影響,包括透明層、卵子細胞膜、紡綞體、粒線體及細胞骨架。其中,紡綞體的微管所受的影響很重要,它很容易受到溫度變化的破壞。一旦受到破壞,容易導致染色體不正常的排列,造成將來的胚胎染色體異常。傳統觀察紡緟體的方式是使用螢光染色或電子顯微鏡。這些方法需用到固定的步驟,且僅能提供靜態的資訊。同時,卵子一旦被固定後就不能再作動態的觀察了。近來發展的紡綞體觀測儀可以觀察活的卵子紡綞體。觀察後的卵子仍可繼續受精發育成胚胎,也因此可以重覆性地評估環境中的影響因子以及作為觀察時間性的序列變化。林口長庚醫院於數年前引入此先進機器,並藉此改良卵子冰凍的方式。

  基本上有兩種方式冰凍卵子-慢速冷凍與急速冰凍(玻璃化)。慢速冷凍法是逐步增加冷凍保護劑的濃度來控制細胞脫水及保護劑進入的速度;常用的保護劑為1.2-propanediol﹐應用於卵子及分裂期胚胎的冷凍,而囊胚期胚胎的冷凍則用glycerol作為冷凍保護劑。慢速冷凍法利用人工植冰控制結冰方向,配合可程式電腦降溫機慢慢脫水及降溫,有效達到細胞脫水的效果。他的缺點主要是冰凍過程較費時(>小時)且消耗較多的液態氮。

   玻璃化急速冷凍法原來在畜牧界較被廣泛使用,近年來逐漸被臨床胚胎實驗室採用。常用的保護劑為ethylene glycolDMSO,相對濃度較慢速冷凍法高很多。成功的關鍵在於將含胚胎的少量冷凍液(體積愈小愈好)置於載體(如:gridcryoloopcryotopcryoleaf等)上,再快速放入液態氮中,全程須具備熟練的操作技巧,以縮短操作時間,避免細胞傷亡。它的優點是步驟省時簡單,液態氮消耗少。以目前的數據看來,玻璃化急速冷凍法的前景看俏,甚至有人認為幾乎可取代慢速冷凍法。

   目前冷凍卵子技術已逐漸純熟,女性患者可藉由冷凍卵子預留生機。受惠最多的應該是年輕的癌症、卵巢疾病女性。例如白血病、淋巴癌、子宮內膜異位症婦女可考慮預先保存卵子。內科醫師遇到年輕女性罹患癌症,需進行化學治療之前,或可提供病人預存卵子,未來還有結婚、生子的機會。


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